Патогенные сальмонеллы. Род Сальмонелла – методы обнаружения сальмонелл в патологическом материале и продуктах Бактериологические методы исследования

№ 2 Возбудители сальмонеллезов. Таксономия. Характеристи­ка. Микробиологический диагноз сальмонеллезов. Лечение.
Острая кишечная зоонозная инфекция, вызываемая сероварами сальмонелл, характери­зующаяся поражением ЖКТ.
Морфологические свойства: подвижные, грам«-» палочки, капсулы нет. Хорошо растут на простых питательных и желчесодержащих средах. На плотных – образуют колонии в R-и S-формах, на жидких – помутнение. На лактозособержащих средах образуют бесцветные колонии.
Биохимическая активность: ферментация глюк. до кислоты и газа, отсутствие ферментации лактозы, продукция сероводорода, отсутствие индолообразования.
Антигенная структура : соматический О-антиген, жгутиковый Н-антиген, Некоторые – К-антиген. Род Salmonella состоит из двух видов - вида S. enterica, в который включены все сальмо­неллы, являющиеся возбудителями человека и теплокровных животных, и вида S. bongori, который подразделяется на 10 сероваров.
Вид S. enterica разделен на 6 подвидов, ко­торые подразделены на серовары. Некоторые серовары сальмонелл, в част­ности S. typhi, имеют полисахаридный Vi-антиген, являющийся разновидностью К-антигена.
Эпидемиология. Возбудителями сальмонеллеза является большая группа саль­монелл, входящая в подвид enterica . Наиболее часто возбудителями сальмонеллезов у человека являются серовары S. Typhimurium, S. Dublin, S. Choleraesuis. Основные факторы передачи - мясо, молоко, яйца, вода.
Патогенез и клиника. Заболевание протекает в локальной форме гастроэнтери­та, ведущий синдром - диарейный. Инвазировав слизистую тонко­го кишечника через М-клетки и проникнув в подслизистую, сальмонеллы захватываются макрофагами, пере­носясь ими в пейеровы бляшки, где формируют первичный очаг инфекции. При этом выделяются эндо­токсин и белковый энтеротоксин. Энтеротоксин активирует поступление в просвет кишечника большого количества жидкости, К, Na. Понос, рвота.
Иммунитет: Ненапряженный, серовароспецифический, опосредован секреторным IgA, который предотвращает процесс пенетрации сальмонеллами слизистой тонкого кишечни­ка. В крови могут определяться антитела.
Микробиологическая диагностика. Бактериологическому исследованию под­вергают рвотные массы, промывные воды же­лудка, испражнения, желчь, мочу, кровь. При идентификации выделенных культур необходим широкий набор диагностических О- и Н- сывороток.
Для серологического исследования приме­няют РНГА, ИФА. Важное диагностическое значение имеет нарастание титра антител в динамике заболевания.
Лечение. Применяется патогенетическая терапия, направленная на нормализацию вод­но-солевого обмена. При генерализованных формах - этиотропная антибиотикотерапия.
Сальмонеллезные групповые, адсорбированные О- и Н-агглютинирующие сыворотки. Применяются для установления серогрупп и сероваров сальмонелл в реакции агглютинации.
Сальмонеллезные О- и Н-монодиагностикумы представляют со­бой взвеси сальмонелл, убитых нагреванием (О-диагностикумы) или обработкой формалином (Н-диагностикумы). Применяются для серодиагностики брюшного тифа.
Профилактика . Специфическая профилактика сальмонеллеза у с/х животных и пти­ц. Неспецифичес­кая профилактика - проведение ветеринарно-санитарных мероприятий.

К роду Salmonella относятся возбудитель брюшного тифа S. typhi, паратифов - S. paratyphi A, S. schottmuelleri и возбудители пищевых токсикоинфекций, получивших название сальмонеллезов.

Морфология и тинкториальные свойства. S. typhi, S. paratyphi A, S. schottmuelleri - короткие палочки с закругленными концами, имеют перитрихиальные жгутики, грамотрицательные.

Культивирование и ферментативные свойства. На дифференциально-диагностических средах (Эндо, Левина) образуют прозрачные бесцветные колонии. Сальмонеллы обладают сахаролитическими свойствами: S. typhi ферментирует глюкозу, мальтозу, маннит до кислоты, S. paratyphi и S. schottmuelleri - те. же сахара, но до кислоты и газа, что служит дифференциально-диагностическим признаком. При разложении белков S. typhi и S. schottmuelleri образуется сероводород. Желатин не разжижают.

Антигенная структура и токсинообразование сальмонелл. Сальмонеллы содержат О-антиген-липополисахаридно-протеиновый комплекс, идентичный эндотоксину, Н-антиген и К-антиген - поверхностный, оболочечный, капсульный. Идентификация сальмонелл проводится по антигенным свойствам, согласно классификации, предложенной Кауфманом и Уайтом и построенной по следующему принципу: все сальмонеллы по общности О-антигенов разделены на группы, обозначенные прописными буквами латинского алфавита (А, В, С, D, Е и т. д.); внутри каждой О-группы сальмонеллы подразделяются на серологические варианты на основании различного строения Н-антигенов, обозначенные строчной буквой латинского алфавита и цифрами. В Н-антигенах выделяют две фазы: первую - специфическую и вторую - не специфическую. При идентификации сальмонелл используются диагностические агглютинирующие адсорбированные сыворотки.

Сложная антигенная структура S. typhi включает О-, Н- и Vi-антигены, но такие полноценные в антигенном отношении бактерии выделяются только в разгар заболевания, а в период реконвалесценции и при пересевах в лабораторных условиях Vi-антиген теряется.

Резистентность. Сальмонеллы довольно устойчивы во внешней среде. В зависимости от условий (температура, влажность, инсоляция и др.) они могут сохраняться до года. Дезинфицирующие вещества вызывают гибель сальмонелл в течение нескольких минут, нагревание до 60 °С - через 10-15 мин.

Патогенность для животных. Брюшным тифом и паратифом болеют только люди.

Клинические симптомы заболевания характеризуются постепенным повышением температуры, общим недомоганием, которое переходит в состояние глубокой интоксикации организма, за что заболевание и получило название typhus. Это состояние обусловлено действием эндотоксина, который в разгар заболевания выделяется в больших количествах в результате массовой гибели микробов, чему способствуют образующиеся антитела.

Бактерии с кровью попадают в печень, селезенку, костный мозг, лимфатические узлы тонкой кишки, где размножаются, обогащая кровь возбудителем. Наступает фаза паренхиматозной диффузии. Сальмонеллы, накапливаясь в желчном пузыре в массовом количестве, вторично попадают в тонкую кишку и размножаются в лимфатических образованиях, которые воспаляются, некротизируются, изъязвляются, что может привести к разрушению стенки кишечника, т.е. перфорации - одному из тяжелейших осложнений брюшного тифа. Особенно благоприятные условия для размножения тифозные бактерии находят в желчном пузыре, где они задерживаются наиболее долго и, выделяясь в кишечник, усиливают патологические его поражения. Выделительно-аллергическая фаза выделения микробов - составляет следующий этап патогенеза. Выделяются бактерии из организма не только с испражнениями, но и с мочой, молоком кормящей матери. Выделительная стадия переходит в стадию выздоровления, сопровождающуюся возрастанием титра специфических антител.

Иммунитет. Врожденного иммунитета к инфекциям, вызываемым возбудителями брюшного тифа и паратифов, не существует. Перенесенное заболевание оставляет прочный иммунитет и случаи повторного заболевания редки. Однако возможны рецидивы, а переболевшие брюшным тифом становятся хроническими бактерионосителями.

Лабораторная диагностика сальмонелл. При диагностике учитываются эпидемиологические данные и клинические симптомы. С первого дня заболевания необходимо исследовать кровь. Метод гемокультуры является решающим и ранним методом. Наилучшей элективной питательной средой служит среда с желчью, нейтрализующая антитела, бактерицидные свойства сыворотки крови. Можно выделять культуру возбудителя из костного мозга, мочи, розеол, но эти методы применяются редко. В период реконвалесценции выделяют возбудителя из испражнений. Выделенные культуры идентифицируются по биохимическим и антигенным свойствам.

При определении вида сальмонелл сначала ставится реакция агглютинации с поливалентной сывороткой, дающей возможность определить принадлежность выделенной культуры к роду сальмонелл, затем определяется группа с помощью отдельных групповых адсорбированных сывороток, а затем и вид сальмонелл - в реакции агглютинации с монореценторными специфическими Н-сыворотками.

Исследование сыворотки больных может проводиться в первые дни заболевания обнаружением неполных антител с помощью реакции Кумбса и с 4-5-го дня - полных антител в реакции Видаля, которую ставят повторно через несколько дней с целью определения нарастания титра антител. Однако наряду с преимуществами постановки реакции Видаля (простота реакции, получение быстрого ответа, возможность ретроспективного диагноза) метод имеет и недостатки: не является ранним, антитела могут быть и у переболевшего (анамнестическая реакция) и у привитого («прививочный Видаль»). Нужно учитывать и тот факт, что Н-антитела сохраняются длительно, а О-антитела исчезают из крови переболевшего довольно быстро.

С целью обнаружения антител в сыворотках крови больных брюшным тифом применяется реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Большую трудность представляет выявление бактерионосителей. Бактериологические исследования, носящие массовый характер при периодических обследованиях работников пищевых предприятий и детских учреждений, занимают много времени и не всегда результативны, так как даже от заведомо известного носителя трудно бывает выделить микроб. В настоящее время для обнаружения носителя широко используют серологический метод-реакцию Vi-гемагглютинации с сывороткой носителя. Vi-антиген по химической природе является полисахаридом, его извлекают в чистом виде и адсорбируют на поверхности эритроцитов 0 группы крови человека. Сыворотка носителя вызывает реакцию гемагглютинации при взаимодействии с Vi-эритроцитарным диагностикумом. У носителя реакция положительна в небольших разведениях. Выявленные реакцией Vi-гемагглютинации носители обследуются бактериологическими методами (выделение культуры из испражнений, дуоденального содержимого).

При необходимости для эпидемиологической расшифровки заболеваний проводится дифференцирование выделенных культур с помощью Vi-бактериофагов, обладающих строгой типоспецифичностью. При фаготипировании используется 78 типов Vi-бактериофагов, с помощью которых выявляется такое же количество фаготипов этих бактерий. Метод фаготипирования дает возможность устанавливать или исключать предполагаемые источники инфекции, прослеживать эпидемиологические связи, отличать местные случаи от «привозных» и спорадические заболевания от эпидемических.

Эпидемиология сальмонелл. Источником и резервуаром инфекции является только человек: больной или носитель. Механизм передачи фекально-оральный, пути распространения - при непосредственном контакте, с инфицированной пищей (молоко), водой, зараженной сточными водами. При сравнительно низкой заболеваемости в настоящее время основное значение имеет контактно-бытовой путь передачи - через загрязненные руки, посуду, белье и т. п. Заболеваемость характеризуется летне-осенней сезонностью.

Специфическое лечение и профилактика. Для лечения больных применяются антибиотики широкого спектра действия, группа тетрациклина, левомицетин. Антибиотикотерапия, однако, не предупреждает рецидивы и длительное бактерионосительство. Советские и зарубежные исследователи, изучая механизм действия антибиотиков в клинических условиях, обратили внимание на то, что их эффективность тесно связана со степенью развития специфического иммунитета. Поэтому, кроме антибиотиков, рекомендуют проводить лечение средствами, которые специфически стимулируют иммуногенез (корпускулярная вакцина, парциальные антигены). При комплексной иммуноантибиотикотерапии (антибиотики и раздельно моновакцина и Vi-антиген) у больных брюшным тифом значительно сокращается частота рецидивов, отсутствует формирование бактерионосительства.

С целью профилактики применяются брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi-антигеном (по эпидемическим показаниям). Для иммунизации военнослужащих используется химическая сорбированная тифозно-паратифозно-столбнячная вакцина (TABle), coдержащая выделенные из брюшнотифозных, паратифозных А и В бактерий комплексные антигены и очищенный столбнячный анатоксин.

Микробиология: конспект лекций Ткаченко Ксения Викторовна

4. Сальмонеллы

4. Сальмонеллы

Род Salmonella включает в себя более 2500 сероваров.

Морфология сходна с другими представителями семейства. Бактерии подвижны, спор и капсул не образуют.

Хорошо растут на простых питательных средах. Образуют небольшие прозрачные колонии.

Биохимические свойства:

1) ферментируют углеводы до кислоты и газа;

2) лактозу не разлагают;

3) дезаминируют и декарбоксилируют некоторые аминокислоты.

По биохимическим различиям род делится на шесть групп.

Антигенная структура:

1) О-антиген. По его строению сальмонеллы делятся на 65 серогрупп;

2) Н-антиген. По его строению внутри серогруппы сальмонеллы делятся на серовары.

У человека сальмонеллы могут вызывать две группы заболеваний:

1) антропонозные – брюшной тиф и паратиф А и В; возбудители: S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi B;

2) зооантропонозные – сальмонеллезы; возбудители: S. typhimurium, S. haifa, S. anatum, S. panama, S. infantis.

Брюшной тиф и паратиф А и В объединены в одну группу – тифопаратифозные заболевания – из-за общего возбудителя, клиники, патогенеза. Источник инфекции – больной (или бактерионоситель).

Заболевание включает в себя пять фаз.

1. Фаза внедрения возбудителя в организм, прикрепления его к рецепторам мембран энтероцитов и проникновения внутрь клеток (соответствует инкубационному периоду болезни).

2. Фаза первичной локализации: сальмонеллы проникают в лимфатический аппарат тонкого кишечника, сенсибилизируют его, размножаются в макрофагах; это сопровождается гибелью микроорганизмов и выделением эндотоксина, который попадает в кровь и вызывает эндотоксинемию (соответствует продромальному периоду).

3. Фаза бактериемии: возбудитель прорывает лимфатический барьер и попадает в кровь, распространяясь по всем паренхиматозным органам (начало болезни).

4. Фаза вторичной локализации: в паренхиматозных органах возникают брюшнотифозные гранулемы (разгар болезни).

5. Фаза выделительно-аллергическая: повторный контакт возбудителя с первичносенсибилизированным лимфатическим аппаратом тонкого кишечника; образуются язвы на слизистой оболочке.

Исход болезни может быть различным:

1) выздоровление;

2) формирование носительства;

3) летальный.

Диагностика тифопаратифозных заболеваний:

1) в фазу бактериемии – кровь на гемокультуру (РПГА), если есть сыпь – соскоб с розеол;

2) в фазу реконвалесценции – бактериологическое исследование фекалий, мочи, желчи;

3) для выявления носительства – серологическое исследование.

Этиотропная терапия: антибиотики с учетом чувствительности возбудителя.

Специфическая профилактика: убитая брюшнотифозная вакцина.

Вторая группа заболеваний – сальмонеллезы – характеризуется многообразием клинических проявлений. Источники инфекции – больные животные, инфицированные продукты питания. Путь заражения алиментарный. Чаще всего сальмонеллез протекает как пищевая токсикоинфекция. При этом сальмонеллы поражают энтероциты тонкого кишечника и фиксируются в его лимфатическом аппарате. При прорыве лимфатического барьера развивается бактериемия, происходит разнос возбудителя по различным органам, регистрируются внекишечные формы сальмонеллеза.

К этому роду семейства энтеробактерий относится более 2000 различных бактерий, вызывающих заболевания человека и животных. Эти заболевания называют сальмонеллезами. Сальмонеллы сходны по морфологическим, культуральным и ферментативным свойствам, но отличаются по антигенной структуре.

Сальмонеллы делят на монопатогенные и полипатогенные. К первым относятся возбудители брюшного тифа, паратифа А и паратифа В. Этими заболеваниями болеет только человек. Ко второй группе относятся возбудители заболеваний, поражающие человека и животных.

S. typhi впервые были обнаружены Эбертом (1880) в органах человека, погибшего от брюшного тифа. Ашар и Бансод (1886) при заболеваниях, сходных с брюшным тифом, выделили из гноя и мочи больных бактерии, отличающиеся по биохимическим и серологическим свойствам от возбудителей брюшного тифа. Их назвали S. paratyphi А и S. paratyphi В. Почти одновременно американский ученый Д. Сальмон (1885) впервые описал возбудителей холеры свиней (S.choleraesuis). В дальнейшем было описано множество сходных бактерий, объединенных в род Сальмонелла, названного по имени ученого, их описавшего.

Морфология . Все сальмонеллы мелкие, 1,0-3,0 × 0,6-0,8 мкм палочки с закругленными концами. Грамотрицательны. Подвижны, перитрихи. Спор и капсул не образуют.

Культивирование . Сальмонеллы - факультативные анаэробы. Они не требовательны к питательным средам. Хорошо растут на МПА и МПБ при 37° С (от 20 до 40° С) и рН среды 7,2-7,4 (от 5,0 до 8,0). На МПА образуют нежные, полупрозрачные, слегка выпуклые, блестящие колонии, в МПБ - равномерное помутнение.

При первичном посеве материала от больных (кал, моча, рвотные массы, кровь, желчь) часто отмечают медленный рост сальмонелл. Для их накопления производят посев на среды обогащения: селенитовый бульон, среду Мюллера, среду Кауфмана. Используют также элективные (избирательные) среды: желчь (10-20%) и среду Раппопорт.

На дифференциально-диагностических средах Эндо, ЭМС, Плоскирева сальмонеллы растут в виде бесцветных колоний, так как не расщепляют лактозу, входящую в состав среды. На висмут-сульфитном агаре через 48 ч они образуют колонии черного цвета, оставляющие след после того, как их снимают петлей (кроме сальмонелл паратифа А).

У свежевыделенных культур S. paratyphi В после инкубации в термостате в течение 18-20 ч и выдерживания при комнатной температуре в течение 1-2 сут на периферии колонии образуется слизистый вал.

Ферментативные свойства . Сальмонеллы расщепляют глюкозу, маннит, мальтозу с образованием кислоты и газа. Исключением являются возбудители брюшного тифа (S. typhi), которые расщепляют эти сахара только до кислоты. Сальмонеллы не ферментируют лактозу и сахарозу. Протеолитические свойства: большинство сальмонелл расщепляет белковые среды с образованием сероводорода (возбудители паратифа А отличаются отсутствием этого свойства). Индол не образуют. Желатин не разжижают.

Токсигенность . Сальмонеллы содержат эндотоксин - липополисахариднопротеиновый комплекс.

Антигенная структура и классификация . Еще в начале XX века ученые заметили различную природу антигенов сальмонелл. Кауфман (1934) на основании результатов реакции агглютинации разных сальмонелл с набором сывороток разделил все сальмонеллы на группы и типы и предложил диагностическую схему их антигенной структуры. В соответствии с этой схемой в настоящее время производят идентификацию сальмонелл.

Сальмонеллы содержат два антигенных комплекса: О и Н,О-антиген - липополисахариднопротеиновый комплекс; он термостабилен, инактивируется под действием формалина. Н-антиген связан со жгутиками, имеет белковую природу; он термолабилен, инактивируется под действием спирта и фенола, но устойчив к воздействию формалина.

Все сальмонеллы разделены на О-группы, каждая из которых характеризуется наличием определенных О-антигенов: основного, обозначенного арабской цифрой (2, 4, 7, 8, 9 и т. д.), и дополнительных, общих для нескольких О-групп (1, 12). В настоящее время известно более 60 О-групп, обозначаемых прописными буквами латинского алфавита (А, В, С, D, Е и т. д.).

S. typhi содержит, кроме того, Vi-антиген, который расположен в микробной клетке более поверхностно, чем О-антиген, и препятствует агглютинации культуры с О-сывороткой. Этот антиген термолабилен. Его присутствие связывали с вирулентностью возбудителя. Vi-антиген содержится также в клетках S. paratyphi С.

Н-антигены сальмонелл имеют две фазы. Сальмонеллы различных серовариантов одной О-группы имеют различную первую фазу Н-антигена, которую обозначают строчными буквами латинского алфавита: а, b, с, d, eh ... u, z и т. д. Вторую фазу Н-антигена обычно обозначают арабскими цифрами: 1, 2, 5, 6, 7 и строчными латинскими буквами. Сочетание различных О- и Н-антигенов определяет антигенную структуру культур и их название.

В практической работе для определения антигенной структуры сальмонелл используют адсорбированные монорецепторные агглютинирующие сыворотки, которые содержат антитела к одному антигену. Ставят реакцию агглютинации на стекле и по наличию агглютинации с определенными сыворотками характеризуют антигенную структуру выделенной культуры. Например, культура агглютинируется О-сыворотками "9" и "12" и Н-сывороткой "d"; находят в схеме серовар с таким антигенным составом (S. typhi), ставят дополнительно реакцию с Vi-сывороткой

Имеются наборы специфических сальмонеллезных фагов, которые лизируют только сальмонеллы соответствующего фаговара. Для определения фаговара культур S. typhi, содержащих Vi-антиген, в нашей стране выпускают 45 фагов; для S. paratyphi В-11 фагов; S. paratyphi А - 6 и т. д. Эти исследования проводят для определения источника и путей передачи инфекции.

Устойчивость к факторам окружающей среды. Сальмонеллы довольно устойчивы. При температуре 100° С погибают мгновенно, при 60-70° С - за 10-15 мин. Они хорошо переносят низкую температуру, могут сохраняться в чистой воде и льду в течение нескольких месяцев; в копченом и соленом мясе - до 2 мес. Устойчивы к высыханию, длительно сохраняются в пыли.

Под действием дезинфицирующих веществ погибают в течение нескольких минут (2-5% раствор фенола, 1:1000 раствор сулемы, 3-10% раствор хлорамина).

Восприимчивость животных . Большинство сальмонелл вызывает заболевания человека и многих видов животных и птиц (полипатогенные).

Брюшной тиф, паратифы А и В

Источник инфекции . Больной человек и бактерионоситель.

Пути передачи . Возбудители инфекции передаются через предметы, загрязненные выделениями человека, через руки, воду, пищу. Часто возбудителей переносят мухи. В зависимости от путей передачи различают бытовые, водные, пищевые вспышки брюшного тифа и паратифов.

Патогенез . Заражение происходит через рот. Из ротовой полости микроорганизмы попадают в желудок, где частично разрушаются под воздействием желудочного сока и ферментов. Оставшиеся сальмонеллы поступают в тонкий кишечник, проникают в лимфоидную ткань тонкого кишечника (групповые лимфатические и солитарные фолликулы), в которой размножаются в течение инкубационного периода (10-14 дней). К концу этого срока возбудители поступают в лимфу и кровь (бактериемия) и разносятся по всему организму. В этот период они локализуются в лимфоидной ткани внутренних органов, системе макрофагов, печени, селезенке, костном мозге. Сальмонеллы накапливаются в желчном пузыре, где находят благоприятные условия для размножения, так как желчь - хорошая питательная среда для этих бактерий. При этом они вторично попадают в тонкий кишечник и, поражая уже сенсибилизированную лимфоидную ткань (групповые лимфатические и солитарные фолликулы), вызывают образование специфических брюшнотифозных язв (рис. 42).

В период бактериемии часть микроорганизмов разрушается, при этом освобождается эндотоксин и возникают явления интоксикации: повышается температура, появляется общее недомогание, слабость, головная боль и т. д. С конца 2-й и начала 3-й недели сальмонеллы начинают выделяться из организма с калом, мочой, слюной и т. п.

Период реконвалесценции (выздоровления) характеризуется очищением организма от возбудителя, усилением фагоцитарной активности клеток, накоплением антител в крови.

Однако при брюшном тифе и паратифах бактериовыделение часто не заканчивается с выздоровлением больного - формируется бактерионосительство. Хронические воспалительные явления в желчном пузыре способствуют переживанию сальмонелл в желчи и их длительному выделению из организма (иногда до нескольких лет).

Иммунитет . Постинфекционный иммунитет достаточно напряженный и длительный. Повторные заболевания наблюдаются редко. В течение болезни вырабатываются антитела: в концу 1-й недели появляются агглютинины, преципитины и другие виды антител. Количество их нарастает, достигая максимума на 14-15-й день болезни. Антитела сохраняются в сыворотке крови переболевшего Длительное время.

Активность фагоцитов и другие клеточные факторы защиты также имеют значение при формировании иммунного состояния организма.

Профилактика . Соблюдение личной гигиены и проведение всех санитарно-гигиенических мероприятий: надзор за источниками водоснабжения, контроль продуктов питания и за предприятиями общественного питания.

Специфическая профилактика . Химическая вакцина, содержащая полные антигены возбудителей брюшного тифа, паратифов А и В и столбнячный анатоксин (TAB"te). Имеется также брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi-антигеном, введение которой с профилактической целью дает хороший эффект. В очаге заболевания лицам, контактировавшим с больным, дают брюшнотифозный бактериофаг.

Лечение . Антибиотики: левомицетин, тетрациклин и др.

Пищевые токсикоинфекции

При употреблении продуктов, зараженных сальмонеллами различных сероваров (кроме S. typhi, S. paratyphi A и В), возникают пищевые токсикоинфекции.

Источники инфекции . Животные и птицы, больные сальмонеллезами, или здоровые, в организме которых, не причиняя им вреда, находятся сальмонеллы.

Пути передачи . Заражение происходит при употреблении мяса, мясных продуктов, яиц, молока, молочных продуктов, инфицированных сальмонеллами. Наиболее опасным является употребление пищи, в которой происходит размножение и гибель сальмонелл и накопление эндотоксина.

Патогенез . Попав в организм через рот, сальмонеллы проникают в пищеварительный тракт. При этом значительная часть бактерий погибает и освобождается эндотоксин, который может проникнуть в кровь. Появляются симптомы поражения желудочно-кишечного тракта и общего токсикоза. Заболевание длится не более 4-5 дней; иногда переболевшие становятся носителями сальмонелл.

Иммунитет непродолжительный. В крови больных и реконвалесцентов накапливаются различные антитела: агглютинины, преципитины и т. п. Сероваров сальмонелл очень много, а иммунитет специфичен, т. е. направлен только против одного возбудителя, поэтому человек может повторно болеть сальмонеллезом.

Профилактика . Постоянный строгий ветеринарно-санитарный контроль за скотом, убоем и разделкой туш, хранением и обработкой мяса и мясных продуктов. Необходимо строгое соблюдение санитарно-гигиенического режима и личной гигиены на предприятиях общественного питания.

Специфическая профилактика . Людям, находящимся в очагах пищевой токсикоинфекции, следует давать сальмонеллезный поливалентный бактериофаг.

Лечение . Основным терапевтическим средством является дезинтоксикация организма - введение большого количества жидкости, промывание желудка. Применяют также антибиотики.

Внутрибольничная сальмонеллезная инфекция

Возбудителем внутрибольничной сальмонеллезной инфекции чаще всего является S. typhimurim. Отмечаются также "госпитальные" вспышки, вызванные S. heidelberg, S. derby и др. Хотя морфологические и культуральные свойства этих возбудителей не отличаются от свойств других сальмонелл, имеются некоторые биологические особенности, характерные для них. Так, например, возбудители внутрибольничных инфекций относятся к определенным биоварам, они более патогенны для белых мышей и т. п.

Источники инфекции . Чаще бактерионоситель, реже больной.

Пути передачи . Преобладает непрямой контакт (игрушки, белье, предметы ухода за больным). Реже имеют место воздушно-пылевой и пищевой пути передачи.

Патогенез . Заболевание развивается на фоне ослабления организма и снижения его иммунной активности. Возбудитель попадает в организм перорально или через дыхательные пути, что и определяет развитие патологического процесса: расстройство функции желудочно-кишечного тракта с обезвоживанием или поражение органов дыхания, бактериемия, септические осложнения. Заболевают в первую очередь дети раннего возраста.

Иммунитет . Вырабатывается только по отношению к одному серовару сальмонелл.

Профилактика . Строгое соблюдение санитарно-гигиенического режима в лечебных учреждениях.

Специфическая профилактика . При возникновении внутрибольничной сальмонеллезной инфекции детям, контактировавшим с больным, следует давать сальмонеллезный поливалентный бактериофаг.

Лечение . Симптоматическое.

Контрольные вопросы

1. Каковы морфологические, культуральные и ферментативные свойства сальмонелл?

2. На чем основана классификация сальмонелл?

3. Какие заболевания вызывают сальмонеллы?

Микробиологическое исследование

Цель исследования: выделение возбудителей заболевания и определение серовара сальмонелл.

Материал для исследования

2. Испражнения.

4. Дуоденальное содержимое.

В зависимости от стадии болезни исследуют разный материал.

Исследованию могут быть также подвергнуты содержимое розеол, костный мозг, мокрота и материал, полученный на вскрытии - кусочки органов.

При токсикоинфекциях материалом для исследования могут служить промывные воды желудка, рвотные массы, остатки пищевых продуктов.

Независимо от характера взятого для исследования материала с момента выделения чистой культуры исследование ведут по общей схеме.

Основные методы исследования

1. Бактериологический (рис. 43).

2. Серологический.

Ход исследования

Второй день исследования

Вынимают чашки из термостата (инкубация 18-24 ч) и просматривают выросшие колонии невооруженным глазом и при помощи лупы. Несколько (5-6) подозрительных колоний выделяют на среду Олькеницкого или Рассела. Посев производят следующим образом: снятую колонию осторожно, не задевая края пробирки, вносят в конденсационную жидкость, затем штрихами засевают всю скошенную поверхность среды и делают укол в глубину столбика для выявления газообразования. Укол следует производить в центр агарового столбика.

Пробирки с посевами ставят в термостат. Если исследуемый материал был посеян на среду обогащения, то через 18-24 ч производят высев со среды обогащения на чашки с дифференциальными средами. Дальнейшее исследование ведут по общей схеме.

1 (На месте снятых колоний остается черный след (изменяется цвет среды). )

Третий день исследования

Вынимают пробирки с посевами из термостата и просматривают характер роста.

В состав комбинированных сред входят лактоза, глюкоза, иногда мочевина и индикатор. Расщепление глюкозы происходит только в условиях анаэробиоза. Поэтому скошенная поверхность среды при расщеплении глюкозы не изменяется, а столбик окрашивается в цвет, соответствующий индикатору. Бактерии, расщепляющие лактозу и мочевину, изменяют цвет всей среды.

Если выделенные культуры сбраживают лактозу или расщепляют мочевину, меняя цвет всей среды, то они не являются сальмонеллами и можно дать отрицательный ответ.

Культуру, расщепляющую только глюкозу, подвергают дальнейшему изучению: делают мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. При наличии в мазках грамотрицательных палочек изучают их подвижность и ферментативные свойства.

Подвижность можно определить в висячей капле или в раздавленной капле, а также по характеру роста в полужидкой среде Гисса или в 0,2% агаре. При наличии подвижности при посеве уколом рост на среде диффузный, среда мутнеет.

Для выявления ферментативной активности производят посев на среды Гисса, МПБ, пептонную воду. В пробирки с последними средами опускают (под пробку) индикаторные бумажки для определения индола и сероводорода. Делают также посев на лакмусовое молоко.

Четвертый день исследования

Учитывают биохимическую активность по результату ферментации углеводных и других сред (см. табл. 33).

Примечание. к - образование кислоты; кг - образование кислоты и газа; щ - щелочение; + наличие свойства; - отсутствие свойства.

Определив морфологические, культуральные и ферментативные свойства выделенной культуры, необходимо провести анализ антигенной структуры (табл. 34).

Серологическую идентификацию сальмонелл начинают с реакции агглютинации на стекле с поливалентной О-сывороткой А, В, С, D, Е. При отсутствии агглютинации выделенную культуру испытывают с поливалентной О-сывороткой к редким группам сальмонелл. При положительной реакции с одной из сывороток культуру испытывают с каждой О-сывороткой, входящей в состав поливалентной, для определения О-серогруппы. Установив принадлежность культуры к О-группе, определяют ее Н-антигены с сыворотками первой, а затем второй фазы (табл. 35).

Культуру сальмонелл тифа испытывают также с Vi-сывороткой. Возбудители брюшного тифа, содержащие Vi-антиген, испытывают Vi-фагами (их 86). Определение фаготипа имеет большое эпидемиологическое значение (см. рис. 43).

Методика фаготипирования . 1-й метод. В чашки Петри наливают 20-25 мл агара и подсушивают с открытыми крышками в термостате. Дно чашки делят на секторы. На каждом секторе пишут название фага. Изучают 4-6-часовую бульонную культуру, так как она содержит больше Vi-антигена. На поверхность агара наносят 8-10 капель бульонной культуры и стеклянным шпателем растирают ее по поверхности агара. Чашки с посевами подсушивают с открытыми крышками в термостате. На каждый сектор наносят каплю соответствующего типового фага. После подсыхания капель чашки ставят в термостат на 18-24 ч. Результат учитывают невооруженным глазом или с помощью лупы через дно чашки.

Наличие лизиса культуры одним или несколькими типовыми фагами позволяет определить принадлежность выделенного штамма к определенному фаготипу.

2-й метод. На питательную среду культуру наносят каплями. На каждую каплю после высыхания культуры в термостате наносят каплю типового фага. Ставят в термостат.

Степень лизиса выражают по четырехкрестной системе.

Контрольные вопросы

1. Какой материал исследуют при брюшном тифе, паратифах и токсикоинфекциях?

2. В каком периоде заболевания используют метод выделения гемокультуры?

3. В каком периоде заболевания брюшным тифом и паратифами исследуют испражнения и мочу?

4. На какие дифференциально-диагностические среды производят посев исследуемого материала?

5. Какие среды используют для накопления сальмонелл?

6. Что определяют монорецепторными О-сыворотками и что монорецепторными Н-сыворотками?

1. Изучите по табл. 32 характер роста сальмонелл на дифференциальных средах. Посмотрите у преподавателя чашки с посевом сальмонелл тифа на средах Эндо, Плоскирева, висмут-сульфитном агаре. Зарисуйте колонии цветными карандашами и покажите преподавателю.

2. Возьмите у преподавателя культуры сальмонелл, О- и Н-монорепторные сыворотки. Поставьте реакцию агглютинации на стекле. Учтите реакцию и покажите преподавателю.

Выделенная культура дала положительную реакцию агглютинации с О-сывороткой 4. С какими Н-сыворотками надо поставить реакцию агглютинации, если Вы думаете, что это культура сальмонелл паратифа В?

Серологическая диагностика брюшного тифа и паратифов

Реакция Видаля . Со второй недели заболевания в крови больных накапливаются антитела против возбудителя инфекции. Для их выявления исследуют сыворотку крови больного в реакции агглютинации. В качестве антигена используют убитые культуры сальмонелл - диагностикумы.

Для постановки реакции Видаля используют сыворотку больного, набор диагностикумов, изотонический раствор натрия хлорида.

Кровь (2-3 мл) из мякоти пальца или локтевой вены собирают в стерильную пробирку и доставляют в лабораторию. В лаборатории пробирку ставят в термостат на 20-30 мин для образования сгустка, затем пастеровской пипеткой обводят сгусток, чтобы отделить от стенки пробирки, и ставят на 30-40 мин на холод. Отделившуюся сыворотку отсасывают и используют для постановки реакции агглютинации с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифов. Для получения сыворотки кровь можно отцентрифугировать.

При возникновении инфекционного процесса - брюшного тифа или паратифов - в организме вырабатываются О- и Н-антитела к одноименным антигенам возбудителя.

О-антитела появляются первыми и исчезают довольно быстро. Н-антитела сохраняются долго. То же самое происходит и при вакцинации, поэтому положительная реакция Видаля с О- и Н-антигенами свидетельствует о наличии заболевания, а реакция только с Н-антигенами может быть и у переболевших (анамнестическая реакция), и у привитых (прививочная). Исходя из этого, реакцию Видаля ставят раздельно с О- и Н-антигенами (диагностикумы).

Так как клинически брюшной тиф и паратифы А и В сходны, то для выявления природы заболевания сыворотку больного испытывают одновременно с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифа А и В.

Реакцию Видаля широко используют, так как она проста и не требует специальных условий.

Поставить реакцию можно двумя способами: капельным и объемным (см. главу 12). В практике чаще используют объемный метод. При постановке линейной реакции агглютинации количество рядов должно соответствовать количеству антигенов (диагностикумы). Возбудителем заболевания считают микроорганизм, диагностикум из которого агглютинировался сывороткой больного. Иногда отмечают групповую агглютинацию, так как возбудители тифа и паратифов обладают общими групповыми антигенами. В этом случае положительным считают результат реакции в ряду, в котором агглютинацию отмечают в большем разведении сыворотки (табл. 36).

Примечание. В практике реакцию Видаля ставят с четырьмя диагностикумами: брюшного тифа "О" и "Н", а паратифов А и В - с диагностикумами "ОН".

Если агглютинация возникает только в небольших разведениях сыворотки - 1:100, 1:200, то для отличия реакции при заболевании от прививочной или анамнестической прибегают к повторной постановке реакции агглютинации через 5-7 дней. У больного титр антител повышается, а у привитого или переболевшего не изменяется. Таким образом, нарастание титра антител в сыворотке крови служит показателем заболевания.

В ответ на внедрение в организм возбудителей брюшного тифа, обладающих Vi-антигеном, в крови больного появляются Vi-агглютинины. Их определяют со 2-й недели болезни, но титр их обычно не превышает 1:10. Обнаружение Vi-антител связывают с наличием в организме возбудителей брюшного тифа, поэтому определение этих антител имеет большое эпидемиологическое значение, так как позволяет выявить бактерионосителей.

Реакция Vi-гемагглютинации . Это наиболее чувствительная реакция для выявления антител.

Принцип реакции заключается в том, что эритроциты человека (I группы) или барана после специальной обработки могут адсорбировать на своей поверхности Vi-антиген и приобретают при этом способность агглютиниповаться соответствующими Vi-антителами.

Эритроциты с адсорбированными на поверхности антигенами называют эритроцитарными диагностикумами.

Для постановки реакции Vi-гемагглютинации берут:

1) сыворотку крови больного (1-2 мл); 2) эритроцитарный сальмонеллезный Vi-диагностикум; З) Vi-сыворотку; 4) О-сыворотку; 5) изотонический раствор натрия хлорида.

Реакцию ставят в агглютинационных пробирках или в пластмассовых пластинах с лунками.

Кровь у больного берут так же, как для реакции Видаля. Получают сыворотку. Из сыворотки готовят двукратные серийные разведения, начиная с 1:10 до 1:160.

По 0,5 мл каждого разведения вносят в лунку и прибавляют по 0,25 мл эритроцитарного диагностикума. Реакцию ставят в объеме 0,75 мл.

Контролем служат: 1) стандартная агглютинирующая монорецепторная сыворотка + диагностикум - реакция должна быть положительной до титра сыворотки; 2) диагностикум в изотоническом растворе натрия хлорида (контроль) - реакция должна быть отрицательной.

Содержимое лунок тщательно перемешивают, ставят в термостат на 2 ч и оставляют при комнатной температуре до следующего дня (на 18-24 ч).

Учет начинают с контроля. Реакцию оценивают в зависимости от степени агглютинации диагностикума.

Результаты учитывают по четырехкрестной системе:

Эритроциты полностью агглютинированы - осадок на дне лунки в виде "зонтика";

+++ "зонтик" меньше, не все эритроциты агглютинировались;

++ "зонтик" маленький, на дне лунки имеется осадок из неагглютинированных эритроцитов;

Реакция отрицательная; эритроциты не агглютинировались и осели на дно лунки в виде пуговки.

Контрольные вопросы

1. В какой период заболевания ставят реакцию Видаля?

2. Какие ингредиенты необходимы для постановки реакции Видаля?

3. С какими диагностикумами ставят реакцию Видаля?

4. Какая из серологических реакций является самой чувствительной при диагностике тифопаратифозных инфекций?

5. Каким диагностикумом пользуются при постановке реакции Vi-гемагглютинации?

6. Какой сывороткой определяют наличие Vi-антигена у исследуемой культуры?

7. Какое значение имеет определение Vi-фаготипа?

Возьмите у преподавателя О- и Н-диагностикумы из сальмонелл тифа, паратифа А и паратифа В и сыворотку больного. Поставьте реакцию Видаля.

Питательные среды

Среды ЭМС, Плоскирева, висмут-сульфитный агар выпускаются медицинской промышленностью в виде сухого порошка. Их готовят согласно указаниям на этикетке: отвешивают определенное количество порошка, наливают соответствующее количество воды, кипятят и разливают в стерильные чашки Петри.

Среда Рассела . В 950 мл дистиллированной воды добавляют 40 г сухой питательной среды и прибавляют 5 г питательного агара. Нагревают до кипения и растворения порошков. В 50 мл дистиллированной воды растворяют 1 г х. ч. глюкозы и добавляют к приготовленной смеси. Среду разливают в стерильные пробирки по 5-7 мл, стерилизуют текучим паром (2 дня по 2 мин) и скашивают так, чтобы оставался столбик. Среду Рассела с маннитом и сахарозой готовят так же.

Среда Олькеницкого из сухого агара . 2,5 г сухого питательного агара расплавляют в 100 мл дистиллированной воды. В остуженный до 50° С агар прибавляют все ингредиенты, указанные в рецептуре (этикетке). Среду, разлитую в пробирки, стерилизуют текучим паром (3 дня по 20 мин) и затем скашивают. Готовая среда должна быть бледно-розового цвета.

Учебник состоит из семи частей. Часть первая – «Общая микробиология» – содержит сведения о морфологии и физиологии бактерий. Часть вторая посвящена генетике бактерий. В части третьей – «Микрофлора биосферы» – рассматривается микрофлора окружающей среды, ее роль в круговороте веществ в природе, а также микрофлора человека и ее значение. Часть четвертая – «Учение об инфекции» – посвящена патогенным свойствам микроорганизмов, их роли в инфекционном процессе, а также содержит сведения об антибиотиках и механизмах их действия. Часть пятая – «Учение об иммунитете» – содержит современные представления об иммунитете. В шестой части – «Вирусы и вызываемые ими заболевания» – представлены сведения об основных биологических свойствах вирусов и о тех заболеваниях, которые они вызывают. Часть седьмая – «Частная медицинская микробиология» – содержит сведения о морфологии, физиологии, патогенных свойствах возбудителей многих инфекционных заболеваний, а также о современных методах их диагностики, специфической профилактики и терапии.

Учебник предназначен для студентов, аспирантов и преподавателей высших медицинских учебных заведений, университетов, микробиологов всех специальностей и практических врачей.

5-е издание, исправленное и дополненное

Специфическая профилактика не применяется, хотя предложены различные вакцины из убитых и живых (мутантных) штаммов S. typhimurium .